label free 非标定量蛋白质组学

 蛋白质非标记定量技术(label-free是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。Label-free的技术优势就在于蛋白质不需要进行标记,所需样品总量少,耗费低。


技术原理                                                                                                  

label free流程示意图


非标记定量蛋白质组学近年来成为重要的质谱定量方法,按照其原理分,主要有两种。其中spectrum counts类的非标记定量方法,发展比较早,也形成了多种算法进行定量,但是主要的原理都是根据MS2的鉴定结果作为定量的基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量方法的原理是以MS1为基础,计算每个肽段信号在LCMS质谱上的积分,这个也是本公司所采用的Maxquant算法的原理。

 服务流程


                                             


技术优势

1.无需昂贵的同位素标签标记,实验耗费低,操作简单;

2.对样本的操作少,并且不受样本数目的现在,客服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷;

3.可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上,提高低丰度蛋白的检出率和非标定量的准确性;

4.可以检测不同组样本中有无差异的蛋白变化;

5.样本需求量少


仪器类型

Thermo Scientific Q Exactive


样本要求

1.蛋白运输:24小时内可以4℃运输;

2.蛋白长期保存:-20℃;

3.待检测蛋白要求:蛋白量最低300μg,浓度最低要求为1μg/μl,否则同位素无法标记;

4.蛋白提取试剂要求:使用普通的组织、细胞裂解液即可,切忌不要使用二维电泳试剂提??;

5.直接提供组织或细胞:动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg;细胞量>107个;血液体积>500μl。 

 



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