糖基化蛋白质组学 

蛋白质的N-糖基化位点修饰是最重要的蛋白质翻译后修饰之一,主要在复杂的多细胞或组织形成过程中起关键作用。蛋白质的N-糖基化修饰位点具有保守的氨基酸序列NX(S/T),其中X为除脯氨酸以外的其它氨基酸。


技术原理

凝素亲和法是目前糖蛋白质组学中应用最广泛的分离富集方法。凝集素(lectin)是一类糖结合蛋白质,能专一识别某一特殊结构的单糖或聚糖中特定的糖基序列而与之结合,它们与糖链可逆非共价结合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕获之后,通常用特定的单糖通过竞争结合凝集素将糖蛋白或糖肽洗脱下来。蛋白质经过酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)切除连接在天冬酰胺残基(Asn)上的糖链。该处理致使Asn分子量增加0.9890Da。最后用高精度LC-MS质谱仪检测脱糖后的肽段,并通过Maxquant软件检索数据库,确认脱糖后分子量与其理论分子量的变化以及糖基化修饰肽段的序列,从而确定该蛋白质的N-糖基化位点。

N-糖基化位点确定之后,再利用label-free的原理对其进行定量分析。



    实验流程



                                                                  



应用领域

科研: 研究特定疾病发生的遗传变异,如单基因遗传病、罕见疾病基因检测等。

健康: 用于疾病预防及管理,生活方式指导等相关的大众消费基因检测。

农业: 用于品系鉴定、优势性状筛选、群体遗传学分析、亲缘关系分析等。

动植物: 动植物生长发育、抗病、抗逆机制研究以及育种研究。同时可实时更新和补充关联信息的完整性。

医学: 阐释疾病的发生发展机制,发现与疾病相关的生物标志物, 以应用于疾病诊断、治疗、预后及用药研究。


仪器类型

Thermo Scientific Q Exactive,Orbitrap Fusion


样品要求

1.SDS-PAGE条带:5个以上可见考染条带;

      2.溶液(目标蛋白质):目标蛋白质总量>50μg,目标蛋白质纯度>80%;

      3.溶液(大规模蛋白质组):浓度>1μg/μl,蛋白总量>1mg。 


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