标记磷酸化蛋白质组学定量(Pho-iTRAQ)

蛋白质磷酸化:指由蛋白质激酶催化的把ATP的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基(丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)上的过程,或者在信号作用下结合GTP,是生物体内一种普通的调节方式,在细胞信号转导的过程中起重要作用。

蛋白质发生磷酸化是重要的翻译后修饰,它与信号传导、细胞周期、生长发育以及癌症机理等诸多生物学问题有密切关系。研究蛋白质磷酸化对阐明蛋白质功能具有重要意义。

蛋白质磷酸化组学运用磷酸化肽特异性富集方法联合非标定量技术,对组学水平的磷酸化肽进行定性定量分析。


技术原理

本公司将磷酸化(Phospho-rylation)肽段TiO2富集技术和蛋白质标记定量技术(iTRAQ)相结合,实现对磷酸化蛋白质组学的定性、定量研究。其中富集手段包含了公司技术团队多年相关领域经验技术,可有效保证磷酸化肽的超高富集率。



实验流程

磷酸化-iTRAQ标记实验流程:

1.收集不同组别的样本并分别提取蛋白质,评估样本状态、蛋白含量是否充足,后续设计实验给出建议;

2.蛋白质经过还原,封闭后用胰蛋白酶酶切;

3.酶切后的肽段用iTRAQ标记试剂进行标记,标记后去不同样品种的等量肽段进行混合

4.TiO2富集混合标记肽段(博士团队特有技术优化、保证富集率>90%);

5.Thermo Scientific Q Exactive高灵敏质谱检测; 

6.专业生物信息团队定制经典及个性化服务                    


                                               

                                                                                  

 技术优势

1.专业相关领域技术支持团队;

2.经验丰富的实验操作人员,富集效率>90%;

3.独立研发改进的具有技术领先地位的操作方法;

4.动物植物多种案例经验累积;

5.强大的生物信息分析团队。                                                                                                                                                                             


应用领域

科研: 研究特定疾病发生的遗传变异,如单基因遗传病、罕见疾病基因检测等。

临床: 用于癌症易感位点检测、单基因遗传位点检测、心脑血管用药指导基因检测等。

健康: 用于疾病预防及管理,生活方式指导等相关的大众消费基因检测。

农业: 用于品系鉴定、优势性状筛选、群体遗传学分析、亲缘关系分析等。

动植物: 动植物生长发育、抗病、抗逆机制研究以及育种研究。同时可实时更新和补充关联信息的完整性。

医学: 阐释疾病的发生发展机制,发现与疾病相关的生物标志物, 以应用于疾病诊断、治疗、预后及用药研究。



平台介绍

Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos Tribrid 三合一质谱仪是行业领先的高性能质谱仪,采用全新的高容量离子传输管(HCTT)、电动离子漏斗(EIF)、先进的四极杆技术(AQT)、先进的真空技术(AVT)和 ETD HD,进一步提高灵敏度。

新型 Orbitrap Fusion Lumos MS 功能
  • 新型高灵敏度 API 接口将高容量离子传输管和电动离子漏斗结合,旨在提高离子流,降低检测限
  • 先进的主动离子束传输组件(Advanced Active Beam Guide)可防止中性粒子和高速离子簇进入解析离子的四极杆中
  • 先进的四极杆技术结合高灵敏度和离子传输效率,使选中离子从分离窗口中心穿过
  • 先进的真空技术提高了向 Orbitrap 分析仪传输高分子量离子的速度
  • 全新的 ETD HD—高动态范围 ETD 显著提升了碎片离子覆盖范围

成熟的 Tribrid MS 功能

  • Tribrid 三合一结构—包括四极杆质量过滤器、线性离子阱和 Orbitrap 质量分析器
  • 高达 500,000 FWHM 的超高分辨能力,质荷比为 200 时的同位素分辨率高达 240,000 FWHM
  • Orbitrap 和线性离子阱 MS 的采集速率高达 20 HzMSn分析
  • MS 和 MSn 完全并行化使用智能 ADAPT?(所有动态可用并行时间)技术进行分析
  • MS 和 MSn 的同步离子选择 (SPS)实验不仅显著提高识别的多肽和蛋白质数量,还能提高定量分析的准确性(当使用同量异序质量标记时)
  • 裂解的灵活性 — CID、HCD 和可选 ETD 和 EthcD,在 MSn 的任何阶段采用Orbitrap 或线性离子阱检测时均可使用上述功能,以测定代谢物、聚糖和其他小分子的详细结构
  • 通用方法适用于大部分肽段鉴定,无需针对浓度未知的样品进行方法优化,从而降低了常规肽段实验所需的样品和仪器时间要求
  • 直观、灵活的拖放式用户界面简化了方法开发,可实现独特而复杂的工作流程。


样本要求

1.细胞样品:细胞量>108个;

2.组织样品:动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg。 




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