技术原理 

16S rDNA为编码原核生物核糖体小亚基rRNA的DNA序列,具有10个保守区和9个高变区,其中保守区在细菌间差异不大,高变区具有属或种的特异性,随亲缘关系不同而存在差异。16S rDNA扩增子测序,通常是选择1-2个高变区,利用保守区设计通用引物进行PCR扩增,再对高变区进行测序分析和菌种鉴定。16S rDNA扩增子测序技术是研究环境样品中微生物群落结构组成、挖掘样品之间差异的重要手段。


16S rDNA结构示意图


16S rDNA常用引物


实验路线

为提高数据的利用效率,扩增子通常进行混样建库,为此需要在上下游引物的5’端加6-8个碱基的barcode序列,用于区分不同的样品;PCR产物检测合格后,等质量混合到一起,构建PCR-free文库并上机测序。


 


技术路线


样本要求


注:扩增子测序结果的准确性受DNA质量影响较大,所以前期样本采集的过程一定要保证快速和低温环境,提取过程也要确保DNA的完整性和提取量。


实验周期

样本质检合格后,22个工作日。

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